復方苦參黃柏溶液經氧驅動霧化對急性創傷修復模型大鼠EGF、VEGF、TGF-β的影響
竇群立1，袁韓濤2，黃雅松2，申海濱2
（1．陜西中醫藥大學附屬醫院，陜西 咸陽 712000；2．陜西中醫藥大學，陜西 咸陽 712000）

【摘要】目的 探討復方苦參黃柏溶液經氧驅動霧化對急性創傷修復模型大鼠EGF、VEGF、TGF-β的影響。方法 選取SPF級成熟年齡SD大鼠75只，隨機分成五組，各15只：生理鹽水組、復方苦參黃柏溶液組、氧療組、復方苦參黃柏溶液+氧療組、康復新液組。適應性喂養1周后進行造模，并于造模成功之后的第2天開始給藥，在造模后的第3天、第7天、第10天、第14天觀察創面組織學的改變。在第3天、第7天、第14天對創面進行標本采集，用ELISA檢測標本中EGF、VEGF、TGF-β的含量。結果 創面組織學生長情況：在檢測的同一時期，復方苦參黃柏溶液+氧療組成纖維細胞數量，新生毛細血管，膠原纖維等生長明顯強于其余四組，差異有統計學意義（P＜0.05）。生理鹽水組差，其余三組介于三者之間且差異不大。標本中EGF、VEGF、TGF-β含量檢測情況：在檢測的同一時段，復方苦參黃柏溶液+氧療組EGF、VEGF、TGF-β含量明顯高于其余四組，差異有統計學意義（P＜0.05），生理鹽水組EGF、VEGF、TGF-β含量低，其余三組EGF、VEGF、TGF-β含量介于三者之間且差異不大。結論 復方苦參黃柏溶液經氧驅動霧化對急性創傷修復模型大鼠的創面修復有促進作用、亦可提高組織中EGF、VEGF、TGF-β的含量，且三者對創面的修復可能具有相關性。

【關鍵詞】復方苦參黃柏溶液；氧驅動霧化；創傷修復；EGF；VEGF；TGF-β

【中圖分類號】R856.2

【文獻標識碼】B

【文章編號】ISSN.2095-6681.2018.12.192.03
當前經濟化的高速的發展，創傷的發病情況成為心臟病、腦血管病、腫瘤疾病之后，導致人類傷殘甚至死亡第四個原因[1]。本實驗從傳統中藥聯合局部氧療治療創傷修復的思路出發，結合傳統中藥與氧療的方法，創新氧驅動中藥霧化局部外治的新型治療方法，實驗研究復方苦參黃柏溶液氧驅動霧化外治對創傷修復模型大鼠的治療作用，并對其作用機理進行初步探討，以期為治療創傷皮膚修復提供新方法，并為新治療方法提供實驗依據。現將實驗方法及結果報道如下。
1 材料與方法
1.1 動物
清潔級SD大鼠75只，雄性，體重大約在200～250 g，由第四軍醫大學實驗動物中心提供（動物合格證號：SCXK（軍）2012-0007），在實驗動物中心適應性飼養1周。
1.2 藥物與試劑
復方苦參黃柏溶液的組成有：苦參30 g、黃柏20 g、蒼術15 g、艾葉10 g、重樓25 g、花椒12 g。由陜西中醫藥大學附屬醫院中藥房提供，飲片經提純加工成每10 mL相當于原藥材3.5 g的溶液，由陜西中醫藥大學附屬醫院制劑中心提制備。康復新液由四川好醫生攀西藥業有限責任公司提供。TGF-β、VEGF、EGF試劑盒由上海恒遠生物科技有限公司提供。
1.3 主要儀器
離心機，KDC-40（科大創新股份有限公司中佳分公司）；酶標儀，RT-6000（深圳雷杜生命科學股份有限公司）；自動組織包埋機，STD-30（德國萊卡公司）；組織切片機，KHF-524（德國萊卡公司）等。
1.4 方法
1.4.1 造模
造模前大鼠背部脫毛、稱重，腹腔注射10%戊巴bi妥鈉3.5 ml/kg麻醉后，消毒鋪巾，在脊旁0.5 cm兩側，各作一個1.6*1.6 cm2矩形標記，切除全層皮膚，止血后用無菌紗布包扎，常規飼養。
1.4.2 分組及換藥
造模完成后，利用隨機法分組。造模成功后第2天，按文獻方法折算大鼠用藥量 [2]。模型組：15只，每天用生理鹽水濕敷創面20 min。中藥組：15只，每天用復方苦參黃柏溶液濕敷創面20 min。氧療組：15只，每天局部氧療20分鐘。
4.康復新液組：15只，每天用康復新液濕敷創面20 min。中藥氧療組：15只，每天用氧驅復方苦參黃柏溶液霧化創面20 min。霧化步驟：10 ml復方苦參黃柏溶液加入儲藥罐內，通過連接霧化嘴、霧化器儲藥罐、吸入管與氧氣導管作為霧化管道，調節氧氣裝置直至儲藥罐有霧化液氣出現，用霧化液氣對創面進行治療。換藥每天1次，共14天，各組治療完成后用無菌敷料包扎創面。
1.4.3 取材
對創面干預后第3、7、14天。每組5只大鼠，消毒，鋪巾，切除全層皮膚不傷及皮下脂肪及深筋膜，采取標本后頸椎脫臼處死實驗動物。標本一部分稱取重量，加入一定量的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），備用。使用時，用勻漿器將標本和PBS的混合物研磨充分。用離心機在轉速為2000～3000轉/分下保持20 min后移液槍收集上清液等待檢測各項指標。標本融化后仍然保持2～8℃的溫度，使用EGF、VEGF和TGF-β試劑盒進行細胞因子水平檢測；另一部分放在10%福爾馬林溶液中固定24 h，然后脫鈣48 h備用，后期做石蠟切片。

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