酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是將抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶的催化作用相結(jié)合而發(fā)展起來的一種免疫標(biāo)記技術(shù)，既可用于組織、細(xì)胞內(nèi)抗原的檢測，又可用于體 液中抗原抗體的檢測。根據(jù)檢測方法的不同，可將酶聯(lián)法分為雙抗體夾心法、間接法、競爭法、捕獲法和其他ELISA，今天就讓恒遠(yuǎn)來為您講解ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)之競爭法。
競爭法
既可用于抗原半抗原的定量測定，也可用于測定抗體。以抗原競爭法為例，將已知抗體吸附于固相載體，加一定量已知酶標(biāo)抗原及待測抗原，使兩者 競爭與固相抗體結(jié)合，經(jīng)洗滌，zui后結(jié)合于固相抗體上的酶標(biāo)抗原與待測抗原含量呈負(fù)相關(guān)。步驟如下：
（1）已知抗體包被酶標(biāo)板，4℃隔夜。
（2）測定管內(nèi)加一定量酶標(biāo)抗原和待檢樣品，對照管內(nèi)只加相同量酶標(biāo)抗原。溫育，洗滌。
（3）分別于測定管、對照管內(nèi)加一定量底物顯色。
（4）用酶標(biāo)儀測定對照管、測定管內(nèi)OD值，用空白調(diào)零。通過對照管與測定管OD值之 差，計(jì)算標(biāo)本中待測抗原含量。
進(jìn)行ELISA操作時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：
①實(shí)驗(yàn)室溫度應(yīng)控制在18℃～25℃；
②加樣須準(zhǔn)確，同一樣本設(shè)立對照管、測定管各兩孔，取其平均值；
③嚴(yán)格控制溫 育反應(yīng)溫度及時(shí)間，洗滌應(yīng)充分；
④ 結(jié)果判定應(yīng)以儀器為準(zhǔn)，肉眼僅作參考。
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