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人降鈣素原試劑盒說明書

  • 發(fā)布日期:2013-07-09      瀏覽次數(shù):2055
    • 本試劑盒僅供研究使用。

       人降鈣素原試劑盒檢測范圍                                                          96T

      40ng/L -1200ng/L

       人降鈣素原試劑盒使用目的

      本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中降鈣素原(PCT)含量。

       人降鈣素原試劑盒實驗原理

      本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人降鈣素原(PCT)水平。用純化的人降鈣素原(PCT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入降鈣素原(PCT),再與HRP標記的降鈣素原(PCT)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的降鈣素原(PCT)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人降鈣素原(PCT)濃度。

       人降鈣素原試劑盒組成

      1

      30倍濃縮洗滌液

      20ml×1瓶

      7

      終止液

      6ml×1瓶

      2

      酶標試劑

      6ml×1瓶

      8

      標準品(2400 ng/L)

      0.5ml×1瓶

      3

      酶標包被板

      12孔×8條

      9

      標準品稀釋液

      1.5ml×1瓶

      4

      樣品稀釋液

      6ml×1瓶

      10

      說明書

      1份

      5

      顯色劑A液

      6ml×1瓶

      11

      封板膜

      2張 

      6

      顯色劑B液

      6ml×1/瓶

      12

      密封袋

      1個

       人降鈣素原試劑盒標本要求

      1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

      2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

       人降鈣素原試劑盒操作步驟

      1.         標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

      1200ng/L

      5號標準品

      150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

      600ng/L

      4號標準品

      150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

      300ng/L

      3號標準品

      150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

      150ng/L

      2號標準品

      150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

      75ng/L

      1號標準品

      150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

      2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

      3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

      4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

      5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

      6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

      7.         溫育:操作同3。

      8.         洗滌:操作同5。

      9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

      10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

      11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

       人降鈣素原試劑盒計算

        以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

       人降鈣素原試劑盒注意事項

      1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

      2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

      3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

      4.  請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

      5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

      6.底物請避光保存。

      7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

      8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

      9.本試劑不同批號組分不得混用。

      10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

       人降鈣素原試劑盒保存條件及有效期

      1.試劑盒保存:;2-8℃

      2.有效期:6個月

       

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