目前酶聯(lián)免疫法檢測用試劑盒種類繁多，有國外進口的，有國內(nèi)自行研制生產(chǎn)的，如何在眾多的品牌中選擇既能滿足檢測要求又價格低廉的試劑盒是一個問題。本人根據(jù)使用這些試劑盒，在實際檢測中發(fā)現(xiàn)，一般在試劑盒說明書中列出以下指標：zui低檢測限；回收率；交叉反應率；標準曲線圖譜及數(shù)據(jù)，標準曲線至少由5個濃度組成；IC50測定值及變形曲線點數(shù)目的是比較規(guī)范的試劑盒，可以選擇。以下就針對酶聯(lián)免疫試驗進行驗證的幾個方法解析，歡迎閱讀分享。
在使用酶聯(lián)免疫法檢測樣品時，應對方法進行驗證。主要測定以下內(nèi)容：
1 標準曲線的測定，標準曲線至少由5個濃度組成，測定次數(shù)不少于5次，以確定工作濃度范圍和IC50范圍。一般臨界值為IC50附近，檢測靈敏度高。
2 樣品檢測限的測定。
3 樣品添加回收實驗。對禁用藥物可添加定量限和2倍定量限，對于有zui高殘留*(MRL)的藥物，可添加MRL和MRL上下各一個濃度。
準確度：若回收率大于40％符合相應檢測標準的要求。精密度：批內(nèi)變異系數(shù)每批平行樣之間的變異系數(shù)小于或等于25％，對于禁用藥物小于或等于30％。批間變異系數(shù)所有樣品間變異系數(shù)小于或等于30％，對于禁用藥物小于或等于40％。
滿足以上準確度和精密度要求，說明酶聯(lián)免疫方法可行，可用來檢測藥物殘留。
4 對于可用于多殘留檢測的試劑盒，以交叉反應率低的藥物做陽性添加測定臨界值(cut-off)。
5 實際檢測樣品時要包括以下實驗：至少做兩條標準曲線，兩個陰性對照品，兩個添加臨界值(cut-off)的陽性對照品，兩個平行的待檢樣品。檢測結(jié)果出來后通過標準曲線形狀(符合檢測要求為S形)，IC50與臨界值是否相近及陽性樣品回收率，樣品平行情況可確定檢測是否可信。
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